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四楼动物房流程和抓取小鼠方法记录

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这里是浙大实验中心的4楼繁育a区的操作流程,加上抓取小鼠,做基因型鉴定的方法。没有其他层的,因为我还没做过。

Free Classic wooden desk with writing materials, vintage clock, and a leather bag. Stock Photo
Photo by Pixabay

剪脚趾流程

进动物房(要记住自己的五位id密码,进门要一直用)。

到盒子里拿剪刀,袋子,笔,八连管,纸。到内准备间去拿空盒子和铁网以及手套。

注:若发现少东西怎么办?如果是里面有的问工作人员。没有的东西(比如剪刀不见了),把剪刀放在门口进去,去鞋架前面那个架子,把剪刀放上面就可以了,4FA区域对应格子。记得要写上课题组名字。一般这种东西都要消毒啥的,不用管。

查看每一笼情况,有哪几笼要剪。剪的话多准备几个笼子(一般要剪一笼需要多三个笼子,一笼放大鼠,一笼放雄,一笼放雌性。)如果不确定雄雌问工作人员。

要剪的就剪,剪完一笼写下基因型,和序号,和脚趾一起放袋子里。一定不要一起做,很容易错。如果剪下来的找不到了就多剪一段尾巴代替。注意看剪后分出的笼子里有没有饲料,没有的话,房间都有饲料的,你找一下车下面,有没有打开的饲料,没有就重新打开一包用。

剪完后,把东西和脏笼子放污物间,手套还内准备间,收工。

出门,下楼跟一楼的人说把四楼a区的脚趾拿下来,给其他人去鉴定。

分笼流程

进动物房 打印基因鉴定的纸(注意邮箱问题,经常要验证。可以用网易邮箱) 拿剪刀,笔,纸

根据打印分笼信息进行分笼,放好要的鼠(两雌一雄),剩下的鼠集中放一起

分完一笼写纸条,基因型和对应编号

分完后检查每一笼情况,看有没有新生的要剪脚趾,如果太小分辨不出雄雌就下周再剪(一般是周三)

把剩下的鼠放污物间,丢牌子。若要带出,需要写放行单,让里面老师签字后撕下,丢笼子上。

出门,下楼跟一楼的人说把四楼a区的小鼠拿下来

小鼠分笼与基因鉴定

①3个星期大的小鼠按照性别分笼,剪脚趾鉴定。

②把脚趾按照顺序放在EP管中

③把尾巴振到最底部,每个加入75μL的NaOH的Buffer,配平后离心

④用机器进行加热,选择Saved Files的Tail程序(参数已经设定,无需更改)

⑤每个加入75μL的Tris Buffer,涡旋混匀,放入4℃的冰箱冷藏过夜

⑥PCR扩增DNA:配置反应物:0.2μL上游引物+0.2μL下游引物+5μLDNA聚合酶+5μLDDWH20(配置时一般在样本数基础上加3个以防止反应底物因挂壁而不够,先加体积小的引物以便观察是否加入,注意:每加一个引物都需要及时更换枪头,酶与引物需要放在冰上)

⑦PCR扩增DNA:反应物离心涡旋混选再离心后,每孔加入10μL的反应物+2μL底物

⑧PCR扩增DNA,体系离心涡旋混匀再离心,放入机器进行扩增,选择Saved Files的WZC的程序 95℃ 3min 95℃ 30s 58℃ 30s (2-4步循环35次) 72℃ 30s 72℃ 10min 12℃ 冷却 ⑨做2%的琼脂糖胶:2g琼脂糖+100mLTAE(由于高温体系会适当挥发,需要适当多加入一些,可2.15g琼脂糖+110mLTAE)高温加热3min左右(盖子不可盖紧,摇晃时需要打开盖子以防烫伤)至无絮状物加入8μL无毒核糖染料,混匀导入模具冷却

⑩上样:把制好的胶放入电泳装置中,用TAE馍过,上样(一般样品上样8μL,loxp的样品上样6μL,marker上样5μL,上样量大的需要边上样边抬高枪头以防溢出,上样速度需快,否则容易扩散而影响效果)

⑪跑胶:160-180V电压下跑胶20min(一般条带跑至胶的3/4处可停止)

⑫紫外照射下统计基因型

💡捉拿小鼠tips

准备实验时,尽可能快速控制小鼠,迅速完成操作,然后尽早脱离小鼠。反复试探捉拿小鼠,临近小鼠时又收手,会使小鼠产生防范和恐惧心理,甚至产生对抗心理。


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